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美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述

更新時(shí)間:2017-07-31  |  點(diǎn)擊率:1408

  細(xì)胞克隆率的測定是評價(jià)胎牛血清功能的兩大方法之一。本文締一生物/締一生物專家為您分析美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述。

 

美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述


  該檢測主要是評估貼壁細(xì)胞系的*生長狀況。要分析細(xì)胞在合適生長條件下的增殖能力和單細(xì)胞的存活狀況,細(xì)胞在低密度下的接種效率或克隆形成是一個(gè)優(yōu)先選擇的方法。對于評估血清批次的品質(zhì),這是一個(gè)非常靈敏的檢查。該技術(shù)反映出細(xì)胞群體的生長速率差異,并可區(qū)分生長速率的變化(克隆大?。┖图?xì)胞是否存活(克隆數(shù)量)。因?yàn)榇嬖谝恍┘?xì)胞的不均一性,因此需記住,細(xì)胞在低密度時(shí),要長成單獨(dú)的克隆,其生長表現(xiàn)會(huì)很不一樣。因此,即使在*生長條件下,由于細(xì)胞之間的相互作用沒有了,也很少有細(xì)胞能存活。克隆形成是一個(gè)測定細(xì)胞存活的實(shí)驗(yàn),也用于優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基和血清的選擇)。如果能證實(shí)一個(gè)克隆來自一個(gè)細(xì)胞,那么克隆效率就可以確定下來。

  樣本:對于每個(gè)血清批次,加20mlFBS到180mlEMEM中,0.22mm過濾除菌,4℃保存。

  細(xì)胞制備:該實(shí)驗(yàn)只用于貼壁細(xì)胞 (如HFL1 and Mv 1 Lu)。一周前開始制備,2-3天換液。具體制備請參考文章《如何準(zhǔn)備用于生長促進(jìn)曲線測定的細(xì)胞》。

  分析:以低密度接種細(xì)胞(2–50個(gè)細(xì)胞/cm2),接下來固定,染色,計(jì)數(shù)。

  1、對每個(gè)細(xì)胞系和每個(gè)批次血清,標(biāo)記10個(gè)直徑60mm的平皿。標(biāo)記在平皿的側(cè)壁靠下部分,包括對照。

  2、每個(gè)平皿加入5ml含10%待測FBS的培養(yǎng)基,加入400個(gè)細(xì)胞。

  3、在細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃,5%CO2孵育10-14天。

  4、棄掉上清,加入足量石炭酸復(fù)紅-亞甲基藍(lán)溶液,覆蓋每個(gè)平皿,作用10分鐘。

  5、棄掉染液,用蒸餾水沖洗幾遍。平皿倒置在吸水紙巾上,風(fēng)干。

  計(jì)數(shù)并記錄陽性克隆數(shù),以及陽性染色克隆的總表面積(mm2)。計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

  接受標(biāo)準(zhǔn):接種效率%=克隆數(shù)÷接種細(xì)胞數(shù)×100,比較FBS批次之間的結(jié)果,選擇一個(gè)好的批次用于某個(gè)特定細(xì)胞的培養(yǎng)。

  綜上所述,您是不是已經(jīng)對美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。

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