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我們該如何應對支原體污染!

更新時間:2023-01-31  |  點擊率:600

支原體是細胞培養(yǎng)中常見的,干擾實驗結果的一種污染,但由于不容易被察覺,有些污染的細胞仍在繼續(xù)使用。對于細胞培養(yǎng)實驗室,支原體對細胞的污染風險不容忽視,這不僅因為常規(guī)的抗生素對支原體無效,而且因為污染早期也沒有顯著表現(xiàn)。一旦發(fā)生污染,支原體會影響細胞基因表達和營養(yǎng)代謝改變,嚴重干擾實驗結果(包括細胞轉染和病毒包被)。

一般來說,出現(xiàn)污染的細胞應進行丟棄,因為它們可能成為實驗室內(nèi)支原體污染的源頭,造成污染的擴散。但對于費力擴增的細胞(如已轉染,或經(jīng)過體外刺激),有些人不愿意丟棄,因此,在細胞培養(yǎng)過程中,定期監(jiān)測是否存在支原體污染,及時預防支原體污染是每個科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個支原體防控的產(chǎn)品,僅供參考。這些都是德國Minerva Biolabs公司出品,在國際期刊上也具有很高的引用率。

一、環(huán)境中的支原體污染的預防和清除

Mycoplasma Off是一款支原體噴霧劑,用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快(10秒鐘即起效),安全無毒,對細胞不會產(chǎn)生不良影響,噴灑后,可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面,均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設備,可使用Mycoplasma Off濕巾擦拭。

二、細胞培養(yǎng)中支原體污染的祛除

通常來說,被污染的細胞應該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑,其實只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結合,破壞膜通透性,導致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個小時即可完成清除任務。

Mynox Gold®是Mynox®的升級版,它通過四個療程產(chǎn)生作用。每個療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox®,也包含復合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分,但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結合,即結合了二者的優(yōu)點,又去除了二者的不足,因為有的細胞對Mynox®的治療不太適應,而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和,對細胞的毒性效應極小,因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細胞。

三、細胞培養(yǎng)中支原體污染的監(jiān)測

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列,常用的是一步法試劑盒(Venor® Gem OneStep),它采用靈敏的PCR方法,能識別常見的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內(nèi),為穩(wěn)定的凍干粉形式,用緩沖液溶解后可直接使用。細胞上清取2l即可完成支原體的篩查。

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