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警惕!細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染!

更新時(shí)間:2023-03-11  |  點(diǎn)擊率:747

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),對(duì)于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度有嚴(yán)格的要求。不僅要對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用的基礎(chǔ)設(shè)施進(jìn)行維護(hù),還要定期對(duì)環(huán)境進(jìn)行清潔,防止細(xì)胞被真菌、細(xì)菌、支原體等微生物污染。


我們反復(fù)強(qiáng)調(diào)要避免細(xì)胞的支原體污染。那么,支原體對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言,究竟有何種危害?本期內(nèi)容,為大家介紹支原體污染的危害。

支原體發(fā)現(xiàn)于1898年。自1956年Robinson從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體后, 國(guó)內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報(bào)道便層出不窮。支原體廣泛存在于自然界中, 有80余種。


支原體 (Mycoplamsa) 又稱霉形體,歸屬于柔膜體綱 (Mollicutes) ,共有6個(gè)屬,120個(gè)種別。支原體沒有細(xì)胞壁,不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性。


對(duì)支原體進(jìn)行革蘭染色為陰性。不僅如此,支原體對(duì)青霉素這類干擾細(xì)胞壁合成的抗生素,具有天然抗性。


支原體通常附著在細(xì)胞的表面, 并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常功能, 用這些污染后貌似正常的細(xì)胞做試驗(yàn)或生產(chǎn), 將會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。


1、影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖及形態(tài)


細(xì)胞培養(yǎng)物遭受到支原體污染后,會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢,細(xì)胞病變等情況。


具體表現(xiàn)為以下幾點(diǎn):


不僅如此,某些支原體還可在侵入細(xì)胞8小時(shí)內(nèi),使線粒體膨脹,繼而被破壞,細(xì)胞核呈空泡化,細(xì)胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞與細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細(xì)胞無法傳代,甚至整個(gè)細(xì)胞群體溶解。

2、代謝和功能


支原體污染細(xì)胞的情況,在形態(tài)上變化不明顯。但需要注意的是,細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值,會(huì)有比較大的變化。更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,進(jìn)而改變細(xì)胞代謝。


支原體對(duì)細(xì)胞代謝和功能的影響,具體體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:


有研究表明,在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細(xì)胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。


3

引起染色體異常


改變?nèi)旧w組型,通常可導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。


4、影響免疫細(xì)胞產(chǎn)量


對(duì)于巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)體系,支原體會(huì)抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細(xì)菌和病毒的幾率。也有研究表明,支原體可以通過植物血凝素,干擾淋巴細(xì)胞的刺激和分化。


為了盡可能降低細(xì)胞污染支原體的風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)定期對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔。


德國(guó)MB公司的支原體祛除噴霧劑——Mycoplasma-off™,含有針對(duì)支原體的殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。


不僅對(duì)支原體有效,而且能祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物。


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對(duì)于培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角,也應(yīng)提高警惕。德國(guó)MB公司的水槽支原體預(yù)防試劑——Water Shield™,含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周,按1:200比例,直接加入水中,不含醛類或疊氮化物,對(duì)細(xì)胞無毒害,但能有效預(yù)防支原體、細(xì)菌、真菌、等微生物污染 。
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