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工業(yè)檢支原體和科研檢支原體有什么不同,你需要知道

更新時(shí)間:2020-12-16  |  點(diǎn)擊率:1378

工業(yè)包括生物藥生產(chǎn)、CAR-T、干細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等,需要對(duì)主細(xì)胞庫、病毒收獲液、體外擴(kuò)增的細(xì)胞等進(jìn)行支原體檢查。該檢查的方法依據(jù)中國藥典。

科研檢支原體則需要保證細(xì)胞中沒有支原體污染,沒有詳細(xì)的方法規(guī)定。

那么,工業(yè)和科研檢支原體還有哪些區(qū)別呢?

1. 方法上:

工業(yè)可使用培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法和NAT法(核酸擴(kuò)增技術(shù))。NAT法常見的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗(yàn)證后,可以替代前面兩種方法。它尤其適合CAR-T等的放行檢測(cè)。

科研則可采用各種方法,但一般不采用培養(yǎng)法,因?yàn)樘?。科研檢支原體常見方法有PCR法、qPCR法、酶熒光法、恒溫?cái)U(kuò)增法、DNA染色法、細(xì)胞感應(yīng)法等。

2. 用途上:

工業(yè)檢支原體用于過程控制、放行檢測(cè)。生產(chǎn)前和生產(chǎn)后的成品都需要檢。

科研檢支原體是避免支原體污染細(xì)胞,干擾實(shí)驗(yàn),一般是一周就要監(jiān)測(cè)一次。

3. 支原體污染程度:

工業(yè)上支原體污染風(fēng)險(xiǎn)主要是存在于細(xì)胞和成品中。但環(huán)境也需注意,需要定期清潔。

科研上支原體污染風(fēng)險(xiǎn)主要是存在于細(xì)胞中,但環(huán)境也需注意,需要定期清潔。

工業(yè)上,支原體在細(xì)胞和成品中如果發(fā)生污染,也是含量較低,因而需要方法的靈敏度高,通常要求檢測(cè)限達(dá)到10CFU/ml。

科研上,支原體如果污染細(xì)胞上清,則因?yàn)榕囵B(yǎng)液中含有血清,因而繁殖較快,支原體的污染程度較高,通常每ml能達(dá)到10的3次方。因而對(duì)方法的靈敏度要求不高,而更看重方便。

目前,市面上大量存在各種品牌的支原體檢測(cè)產(chǎn)品,以NAT(PCR或qPCR)方法而論,科研和工業(yè)領(lǐng)域可考慮德國Minerva Biolabs產(chǎn)品,因其產(chǎn)品大多為凍干粉型,穩(wěn)定性好,4度即可保存。而且操作較為方便,例如對(duì)于科研來說,PCR有預(yù)分裝型,不用自己再分液,擴(kuò)增后直接上膠。更重要的是試劑盒靈敏度高,覆蓋支原體物種廣(100多種)。對(duì)于工業(yè)來說,qEP和Classic試劑盒還經(jīng)過全面的方法驗(yàn)證,適合放行檢測(cè)。

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